1.概述：将需要量的40%甲醛倒入加热装置内，打开送回风系统，关闭系统新风和排风，让气体扩散30min后，停止送回风系统。甲醛熏蒸消毒12小时后，25%氨水加入组合风柜中效箱内，打开送回风系统循环6小时，再打开新风及排风循环4小时，至洁净风将蒸汽置换干净。
2. 验证目的
检测甲醛熏蒸后对生产区域的空气灭菌效果，判断环境空气是否具备药品的生产条件，并确认甲醛熏蒸消毒周期及表面微生物的监测周期，特制定本方案进行验证。
3. 验证范围
验证我公司洁净厂房甲醛熏蒸的消毒效果及甲醛熏蒸灭菌后室内环境中的残留量。
6.验证内容：
6.1 验证所需文件的准备
洁净区空气消毒规程
人员进出万级洁净Ⅰ区的更衣规程
人员进出万级洁净Ⅱ区的更衣规程
洁净区沉降菌监测规程
洁净区表面微生物监测规程
药品生产验证指南2003版
6.2生物指示剂挑战性试验
6.2.1生物指示剂：黑色枯草变种芽孢杆菌
6.2.2检测方法：取出塑料管内菌片，移至灭菌玻璃平皿内，在各车间选择洁净级别较高或根据工艺条件最易污染的房间将平皿分别置于远离送风处的地（台）面上进行甲醛熏蒸消毒，消毒完毕后按指示剂使用规程进行操作。
6.2.3评价标准：经48小时培养后，若培养液变浑浊，颜色由红变黄判为阳性，若培养液澄清，颜色不变为阳性，继续培养至七天，若仍无菌生长判为灭菌合格。
6.2.4检测结果记录见附表1。
6.3残留量测定
6.3.1取样方法：甲醛熏蒸消毒完毕后，在更衣室、灌装间及洁净走道，用约30L的塑料袋收集室内空气，将袋内空气用由吸收瓶、泵、气流计等组成的装置捕集至瓶内吸收液中（样本数应≥3）。
6.3.2监测方法：甲醛残留量检测操作规程。
6.3.3测试标准:残留物限度＜10-6
6.3.4测试结果见附表2。
6.4甲醛消毒周期及微生物监测周期的确认
6.4.1目的：确认洁净区空气甲醛熏蒸消毒的周期及微生物监测周期
6.4.2检测项目：
6.4.2.1沉降菌
a)检测方法：对间进行甲醛熏蒸消毒后，测试人员按洁净区沉降菌监测规程每天进入洁净区对洁净区洁净级别相对高或易污染的房间布培养皿进行监测。
b)标准：生产洁净室（区）经过甲醛熏蒸消毒后，室内的微生物检测项目应该达到不同洁净级别洁净区要求。
不同级别洁净区微生物最大允许量标准见下表：
洁净度级别 微生物最大允许数
沉降菌CFU/（皿?0.5h）
100级 1
10000级 3
100000级 10
300000级 15
c)沉降菌房间及测试结果记录见附件。
6.4.2.2表面微生物：
a)检测方法：按洁净区表面微生物监测规程进行操作，对车间的设备表面、内部、墙壁、天棚、离送风口最远及离操作最近回风口旁等表面的一定面积用已灭菌的棉球擦拭，然后进行培养。通过培养情况考察生产环境并确定消毒周期
b)标准：见下表
合格标准
区域级别 采样位置
设备、墙壁 地面
百级区 ＜3CFU/25cm2 ＜10CFU/25cm2
万级区 ＜5CFU/25cm2 ＜15CFU/25cm2
蒸后的甲醛残留测试
空气甲醛残留测试 方法如下：l
（1） 取样方法及取样量
在各取样场所，用约30L的塑料袋收集室内空气，将袋内空气用吸收瓶、泵、气流计等组成的装置捕集至瓶内吸收液中（样本数应≧3）。
（2） 供试液的配制
取0.5%硼酸溶液20ml作为吸收液，用溶液吸收法，以1L/min的速度分别让各取样场所的空气通过10min，然后将吸收液移至25.0ml的容量瓶中，加水使成25.0ml，即得。
（3） 试验操作
A：取供试液2.0ml至带栓试管中，加5mol/L的NaOH溶液2.0ml及AHMT溶液2.0ml，轻摇数次混匀后，室温放置20min。然后加KIO4溶液2.0ml，摇2~5min至无气流生成为止；同时用水2.0ml同法制成对照液，在波长550nm附近测最大吸光度。
B：分别取甲醛标准液0、0.5、1.0、1.5、2.0ml，加水使成2.0ml，然后按A操作，测定吸光度，制出甲醛浓度（ug/ml）与吸光度的关系检量线。
环境中的甲醛浓度（10-6）可由下式求出：
甲醛浓度（10-6）=a*22.4/30.03*25*（373+t）/273V
式中 a------供试液中甲醛浓度，
V-----采样气体量，L
t-----采样时平均温度，℃
22．4-----1mol气体在0、1个大气压（101.325kPa）下的体积，L；
30．03---- 甲醛相对分子质量；
25-----供试液全量，ml。
（4） 试液准备
A：甲醛标准液
a甲醛稀释液：精取中国药典中规定“甲醛溶液”1ml,加水准确至200 ml作为甲醛稀释液.精取10ml至碘瓶内，确加入0.1mol/L碘液50ml，加1mol/L氢氧化锂溶液20ml。避光放置15min后，加15ml的10%硫酸，用硫代硫酸钠液（0.1mol/L）滴定。另用水10ml进行空白试验。
（Va-Vb）*1.5013
甲醛稀释液中的甲醛浓度（mg/ml）=------------------------------------
10
式中Va------甲醛稀释液消耗0.1mol/L硫代硫酸钠液量，ml；
Vb------空白试验消耗0.1mol/L硫代硫酸钠液量，ml；
1.5013------1ml碘液（0.1mol/L）相对甲醛的量，mg；
10-------甲醛稀释液取样量，ml。
b：甲醛标准液：精取甲醛稀释液，加水准确稀释1000倍，即得。
B：AHMT溶液
取4-氨基-3-肼-5-巯基-1，2，4-三唑0.5g，加0.2mol/L盐酸100ml溶解，避光保存。需要说明的是，用甲醛消毒时也有不加高锰酸钾，而将甲醛直接放入空调器内送入房间及用氨水中和的方法。
使用甲醛消毒剂消毒的方法：常用36%至40%溶液，用于拦舍、用具、排泄物等的消毒，也可用作器械消毒和标本防腐。放置在密闭室内，每立方米容积用甲醛20毫升加等量水，在文火上加热既发生烟雾反应，密封消毒10小时即可。不适于喷雾消毒。
福尔马林(甲醛溶液) 为含37％—40％甲醛的水溶液，并含有甲醇8％—15％作为稳定剂，以防止甲醛聚合。对细菌、病毒、霉菌、芽孢有强大的杀灭作用，可用于禽舍、器械、种蛋的消毒以及室内空气的熏蒸消毒，也可用作标本、疫苗的防腐剂。10％福尔马林溶液(含甲醛4％)用于一般消毒和器械消毒。禽舍熏蒸消毒，每立方米空间用甲醛溶液15毫升、高锰酸钾7.5克，加7.5毫升水，密闭熏蒸4—10小时。熏蒸消毒应杜绝明火；熏蒸的环境湿度不低于70％，温度高于20℃；熏蒸的物体应在密闭的条件下，且作用足够的时间；不得在带动物情况下采用喷雾消毒。
熏蒸时，使用的福尔马林毫升数与高锰酸钾克数之比为２：１，当反应结束时，如残渣是一些微湿的褐色粉末，则表明两种药品的比例较适宜；若残渣呈紫色，则表明高锰酸钾过量；若残渣太湿，则说明高锰酸钾不足。